肺癌患者為什么要做基因檢測？如何進(jìn)行基因檢測？結(jié)合2022年中國臨床腫瘤學(xué)會(huì)（CSCO）指南[2]和非小細(xì)胞肺癌分子病理檢測臨床實(shí)踐指南（2021 版）[3]的相關(guān)推薦，小編帶您一探究竟！
肺癌患者為什么要進(jìn)行基因檢測？
近十年來，NSCLC的治療，尤其是耙向治療，取得了極大的進(jìn)展，可明顯提高患者治療的客觀緩解率（ORR），延長患者的無進(jìn)展生存期（PFS），并顯著提高患者的生活質(zhì)量（QoL）。而分子分型是NSCLC實(shí)施靶向治療的前提[3]。
研究數(shù)據(jù)表明，我國肺腺癌患者的常見驅(qū)動(dòng)基因包括表皮生長因子受體（EGFR，45%~ 55%）、KRAS（8%~10%）、間變性淋巴瘤激酶（ALK，5%~10%）、少見驅(qū)動(dòng)基因包括ROS1（2%~3%）、 MET（2%~4%） 、HER2（2%~4%）、BRAF（1%~2%）、RET（1%~4%）、罕見驅(qū)動(dòng)基因包括NTRK（<1%）、NRG1/2（<1%）、FGFR2（<1%）等；與西方人群存在較大差異[3]。因此，選擇準(zhǔn)確、快速、恰當(dāng)?shù)臋z測方法，全面篩選出適用靶向藥物的目標(biāo)人群具有重要臨床意義。此外，隨著少見基因變異的不斷發(fā)現(xiàn)以及靶向藥物獲得性耐藥機(jī)制的完善，基因檢測有助于肺癌患者耐藥后的治療選擇[3]。
那么，基因檢測適用于哪些肺癌患者？
肺癌基因檢測適用人群、檢測時(shí)機(jī)和檢測靶點(diǎn)
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肺癌基因檢測的適用人群[2]：
2022 CSCO指南推薦可手術(shù)的Ⅰ~Ⅲ期NSCLC患者和不可手術(shù)的Ⅲ~Ⅳ期NSCLC患者進(jìn)行基因檢測。
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肺癌基因檢測的檢測時(shí)機(jī)和檢測靶點(diǎn)[2]：
對于可手術(shù)的Ⅰ~Ⅲ期NSCLC患者，2022 CSCO指南推薦術(shù)后Ⅱ/Ⅲ期非鱗癌進(jìn)行EGFR突變檢測，以指導(dǎo)輔助靶向治療（Ⅰ級推薦）。
對于不可手術(shù)的Ⅲ~Ⅳ期NSCLC患者，2022 CSCO指南推薦靶向治療前或治療過程中進(jìn)行基因檢測：
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病理學(xué)診斷后保留足夠組織標(biāo)本進(jìn)行分子檢測，根據(jù)分子分型指導(dǎo)治療（1類）：對于非鱗癌組織標(biāo)本進(jìn)行EGFR突變，ALK融合、ROS1、RET融合及MET14外顯子跳躍突變檢測（3類）（Ⅰ級推薦）；
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BRAF V600E突變、KRAS突變、ERBB2（HER2）擴(kuò)增/突變，MET擴(kuò)增以及NTRK融合等基因變異可通過單基因檢測技術(shù)或二代測序技術(shù)（NGS）在腫瘤組織中進(jìn)行，若組織標(biāo)本不可及，可考慮利用游離/腫瘤DNA（cf/ctDNA進(jìn)）行檢測（2B類）（Ⅱ級推薦）；
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腫瘤標(biāo)本無法獲取或量少不能行基因檢測時(shí)，可通過外周血cf/ctDNA進(jìn)行EGFR突變檢測（Ⅰ級推薦）；
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不吸煙、經(jīng)小標(biāo)本活檢診斷鱗癌或混合腺癌成分的患者建議EGFR突變、ALK融合及ROSI融合等檢測（2A類）（Ⅱ級推薦）；
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一/二代EGFR-TKIs耐藥患者，建議再次活檢進(jìn)行EGFR T790M檢測。不能獲取腫瘤標(biāo)本的患者，建議行cf/ctDNA進(jìn) EGFR T790M檢測（Ⅰ級推薦）。
肺癌基因檢測方法包括哪些？需要注意什么？咱們接著往下看！
肺癌基因檢測的方法和注意事項(xiàng)
NSCLC常見的分子病理檢測方法包括Sanger測序、熒光原位雜交（FISH）、實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）、免疫組化（IHC）、NGS等，上述檢測方法在EGFR、ALK、ROS1等靶點(diǎn)的臨床檢測中發(fā)揮著重要作用[3]。
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EGFR靶點(diǎn)的檢測方法和注意事項(xiàng)[3]：
目前EGFR基因突變檢測的方法有很多種，臨床常用的檢測方法包括 Sanger測序法、qRT-PCR法和NGS等。但需要注意的是：
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對于傳統(tǒng)方法檢測的驅(qū)動(dòng)基因陰性晚期肺腺癌患者，推薦進(jìn)行NGS檢測。
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對于一、二代EGFR-TKI耐藥患者，優(yōu)先推薦進(jìn)行T790M檢測（qRT-PCR或NGS）。也可同時(shí)與其他耐藥機(jī)制進(jìn)行檢測或T790M檢測陰性后用NGS進(jìn)行其他耐藥機(jī)制的檢測。三代TKI耐藥患者，推薦進(jìn)行NGS檢測耐藥機(jī)制。
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ALK靶點(diǎn)的檢測方法和注意事項(xiàng)[3]：
由ALK基因重排所導(dǎo)致的ALK融合基因表達(dá)可以在多個(gè)分子水平上進(jìn)行檢測，包括：FISH在DNA水平上檢測ALK基因重排；qRT-PCR檢測ALK融合mRNA；IHC檢測ALK融合蛋白表達(dá)，以及NGS檢測DNA水平上的重排序列或mRNA水平上的融合序列。但需要注意的是：
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在進(jìn)行IHC-Ventana D5F3、FISH、qRT-PCR及NGS檢測結(jié)果判讀時(shí)，對于檢測結(jié)果不能確定、信號不典型或者位于臨界值的患者，應(yīng)建議使用其他技術(shù)平臺進(jìn)行檢測。
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優(yōu)先應(yīng)用IHC- Ventana D5F3進(jìn)行ALK檢測。當(dāng)懷疑檢測標(biāo)本有質(zhì)量問題時(shí)，優(yōu)先應(yīng)用FISH檢測。當(dāng)和其他基因（如EGFR、ROS1等）一起檢測時(shí)，可以進(jìn)行qRT-PCR或NGS檢測。
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ROS1靶點(diǎn)的檢測方法和注意事項(xiàng)[3]：
基于qRT-PCR方法的ROS1融合基因檢測具有較高的靈敏度和特異度，且可與ALK聯(lián)檢；FISH檢測是檢測ROS1重排的“金標(biāo)準(zhǔn)”；NGS檢測ROS1基因變異同樣可在DNA水平上檢測重排序列，也可在mRNA水平檢測融合序列。但需要注意的是：
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IHC檢測ROS1蛋白表達(dá)用于初篩ROS1融合臨床應(yīng)用前，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)經(jīng)過嚴(yán)格的檢測流程、判讀標(biāo)準(zhǔn)、質(zhì)量控制和保證，陽性病例需經(jīng)過其他技術(shù)平臺進(jìn)行驗(yàn)證。
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在進(jìn)行FISH、qRT-PCR及NGS檢測結(jié)果判讀時(shí)，對于檢測結(jié)果不能確定、信號不典型或者位于臨界值的患者，應(yīng)建議使用其他技術(shù)平臺進(jìn)行檢測。
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當(dāng)和其他基因（如EGFR、ALK等）一起檢測時(shí)，可以進(jìn)行qRT-PCR或NGS檢測。
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MET靶點(diǎn)的檢測方法和注意事項(xiàng)[3]：
MET 14號外顯子跳躍突變的檢測包括NGS或qRT-PCR直接檢測缺失MET 14號外顯子的mRNA，或NGS在DNA水平上檢測可能導(dǎo)致MET 14號外顯子剪切的基因變異。但需要注意的是：
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在臨床實(shí)踐中，MET 14號外顯子跳躍突變的檢測，可與其他驅(qū)動(dòng)基因變異同時(shí)檢測，或?qū)ζ渌?qū)動(dòng)基因變異陰性的患者進(jìn)行單獨(dú)檢測。
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應(yīng)根據(jù)可及的檢測平臺、標(biāo)本質(zhì)量及標(biāo)本類型，合理選擇不同的檢測方法。
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可參考其他融合基因檢測策略。當(dāng)組織標(biāo)本不可及時(shí)，血漿標(biāo)本也可以考慮用于MET 14號外顯子跳躍突變的檢測，作為補(bǔ)充。
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其他靶點(diǎn)的檢測方法和注意事項(xiàng)[3]：
HER2、BRAF、KRAS、RET、NTRK等的檢測方法可參照基因點(diǎn)突變 、基因重排類型的檢測方法和檢測策略，當(dāng)仍需進(jìn)一步積累臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。
綜上所述，NSCLC患者在治療前或治療過程中都應(yīng)進(jìn)行基因檢測，以指導(dǎo)治療決策。NSCLC常見的分子病理檢測方法包括Sanger測序、FISH、qRT-PCR、IHC、NGS等，但所有分子病理檢測方法均具有優(yōu)缺點(diǎn)，也受所檢基因變異類型和數(shù)量、標(biāo)本類型、標(biāo)本數(shù)量和質(zhì)量、實(shí)驗(yàn)室條件等影響，醫(yī)生會(huì)根據(jù)實(shí)際情況選擇適合患者的分子病理檢測方法，進(jìn)而根據(jù)檢測結(jié)果指導(dǎo)患者接受相應(yīng)的靶向藥物治療。
參考文獻(xiàn)：
[1]. Li T, et al. J Clin Oncol. 2013 Mar 10;31(8):1039-49.
[2].中國臨床腫瘤學(xué)會(huì)（CSCO）非小細(xì)胞肺癌診療指南.2022版.
[3].非小細(xì)胞肺癌分子病理檢測臨床實(shí)踐指南(2021版)[J]. 中華病理學(xué)雜志,2021,04:323-332.
